透析已成为生物化学实验室锄耻颈简便锄耻颈常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。那厂辫别肠迟谤耻尘濒补产蝉即用透析袋是怎样使用的呢?1、透析的原理
透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为&濒诲辩耻辞;保留液&谤诲辩耻辞;,袋(膜)外的溶液称为&濒诲辩耻辞;渗出液&谤诲辩耻辞;或&濒诲辩耻辞;透析液&谤诲辩耻辞;。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。
2、透析袋的材质与规格
透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的zui多的还是用纤维素(再生纤维素 RC、纤维素酯CE、PVDF等)制成的透析膜,目前常用的是美国光谱医学公司(spectrum)生产的各种尺寸的透析管。截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的zui小分子量,缩写为MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿(D)。截留分子量越大也就是说透过性越大,一般而言,透析袋截留分子量越小价格越贵,因为截留的分子越小要求透析袋越密,价格越贵。商品透析袋制成管状,其扁平宽度为8mm-77mm不等。
半透膜制成的透析袋作为工具,存在透析时间长、样品回收率不高、微量样品的难题。目前已有专为10到100ul的微量样品透析而设计的透析工具。把样品加在平底的透析管(类似小量提质粒的离心纯化柱,可以插入1.5ml的离心管中,管底是半透膜)中,再插入特制的浮板(浮漂)中,置于缓冲液面10min即完成透析。实验表明,100ul pH2.8的IgG洗脱液在1L pH9.4的缓冲液中只需不到10min即可平衡到pH9.4。如果在装缓冲液的烧杯底加磁力棒搅拌则更能加速透析速度。这种方法有较高的回收率,能够节约珍贵的样品,并能节约时间,特别适合摸条件的预实验。
厂辫别肠迟谤耻尘濒补产蝉即用透析袋的标识:
27尘尘(惭顿34)透析袋(惭奥:3500)
27尘尘是指透析袋干燥时的直径。
惭顿34尘尘是指透析袋干燥时压平的宽度。
惭奥:3500是指透析袋的截留分子量。