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T4 DNA 连接酶

特性

■  高效连接粘性末端和平末端
■  T/A 克隆
■  dsDNA 切刻修复
■  构建高丰度克隆文库
■  RNA 和 DNA 的连接

概述

该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5?-磷酸末端和 3?-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。

来源

纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

反应条件

1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl₂，10 mM DTT，1 mM ATP]。推荐 DNA 5? 末端浓度为 0.1-1.0 μM，16℃ 温育。
热失活：65℃ 10 分钟。

质保声明

T4 DNA 连接酶经过严格的质控检测，确保该产物具有zui高的活性和纯度。

单位定义（粘性末端活性单位）

1 单位指在 20 μl 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16℃ 反应条件下，30 分钟能使 50% 的经 HindⅢ 消化的λDNA 片段 [ 5? 端浓度为 0.12 μM（300 μg/ml）] 连接所需的酶量。

浓度

400,000 units/ml 和 2,000,000 units/ml。

注意事项

与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同，T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。

稀释后的 T4 DNA 连接酶应于 -20℃、50% 甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001）中保存。如稀释后马上使用，也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。

只要在反应体系中补加 1 mM ATP，连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液或在

T4 DNA 多聚核苷酸激酶反应缓冲液中进行。